Išsėtinė sklerozė (IS) - tai autoimuninė uždegiminė demielinizuojanti liga, kai imuninės T ląstelės atakuoja centrinę nervų sistemą (CNS) ir sukelia galvos bei nugaros smegenų pažeidimus. Manoma, kad smegenis infiltruojančios CD8+ T ląstelės, kurios buvo nustatytos skirtingose sergančiųjų IS smegenų srityse ir gali ten išlikti daugelį metų, yra reikšmingos IS patogenezėje. Tačiau jų antigenai taikiniai vis dar nežinomi. Pastaraisiais metais pavyko ištobulinti keletą naujų metodų, kuriais pasinaudojus galima atskirti potencialiai autoagresyviąsias T ląsteles nuo kitų smegenų audinį infiltruojančių ląstelių, izoliuoti jas iš užšaldytų biopsinių audinių, klonuoti T ląstelių receptorių (TLR) a ir p grandines, sukurti in vitro funkcionuojančius receptorius, kurie gali būti naudojami tolesnei antigenų paieškai.
Šio projekto tikslas buvo ištirti CD8+ T ląstelių receptorius IS sirgusio ligonio MS4 smegenų autopsijos mėginiuose.
Tyrimui naudoti 10 mkm smegenų audinio pjūviai, kurie buvo dažomi anti-CD8 antikūnais, žymėtais cianinu 3 (Cy3), ir antikūnais anti-Vpi, žymėtais fluoresceino izotiocianatu (FITC). Pjūviai tirti P.A.L.M. Microbeam-Z mikroskopu (Zeiss). CD8+ ir Vpi+ žymenis ekspresuojančios ląstelės buvo žymimos elektroniniu būdu. Atskiros ląstelės izoliuojamos iš audinio lazerio energija ir katapultuojamos į atskirus reakcijų mėgintuvėliu kamštelius. Paskui, naudojant vienos ląstelės polimerazės grandininės reakcijos (PGR) protokolus, buvo analizuojama juTLR p grandiniu raiška. Ląstelės, ekspresuojančios p grandines, toliau buvo tiriamos ieškant atitinkamų alfa grandiniu, naudojant sudėtinę PGR programą, kuri leidžia padauginti visas įmanomas žmogaus TLR alfa grandines.
Iš viso išskyrėme 612 ląstelių, ekspresuojančių CD8 ir Vpi žymenis, ir 732 CD8+, bet Vpi ląsteles. Iš jų buvo susintetintos septynios funkciškai pertvarkytos TLR p grandinės. Atitinkamų alfa grandinių analizė vis dar vyksta.
Iš IS pacientu smegenų audinio išskirti ir in vitro atgaivinti funkciniai T ląstelių receptoriai gali būti naudojami tolesniems eksperimentams, ieškant jų antigenų. Autoagresyviųjų T ląstelių antigenų taikinių atradimas galėtų padėti geriau suprasti IS patogenezę, nustatyti naujus diagnostinius ligos žymenis, patobulinti individualios imunoterapijos galimybes.
